МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АНТИМИКРОБНЫМ ПРЕПАРАТАМ
МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АНТИМИКРОБНЫМ ПРЕПАРАТАМ - раздел Философия, УЧЕБНО-МЕТОДИЧЕСКОЕ ПОСОБИЕ К ПРОВЕДЕНИЮ ЛАБОРАТОРНЫХ ЗАНЯТИЙ ПО ДИСЦИПЛИНЕ «МИКРОБИОЛОГИЯ» 1. Метод Серийных Разведений:
Методом Серийных Разв...
1. Метод серийных разведений:
Методом серийных разведений МИК (минимальная ингибирующая концентрации) антибиотика определяют по минимальной концентрации антибиотика, задерживающей видимый рост микроорганизма в пробирках или на чашках с питательной средой.
Например, для определения МИК тетрациклина в отношении культуры Staphylococcus aureus, выделенной от больного, готовят двух кратно убывающие концентрации этого антибиотика в стандартном питательном бульоне. Контролями культуры и антибиотика являются, соответственно, бульон без антибиотика и бульон с первым разведением антибиотика. В опытные и контрольные пробирки вносят стандартизованную суспензию молодой агаровой культуры S. aureus и после суточной инкубации учитывают результат.
МЕТОД СЕРИЙНЫХ РАЗВЕДЕНИЙ АНТИБИОТИКА:
№ пп
Ингредиенты
Концентрация антибиотика (мкг/мл):
КК
КА
Питательный бульон, мл.
Основной раствор антибиотика (128 мкг/мл), мл вносится только в первую пробирку и контроль антибиотика (КА).
2,0
}
2,0
2,0
}
2,0
2,0
}
2,0
2,0
}
2,0
2,0
}
2,0
2,0
}
2,0Þ
2,0
2,0
2,0
Исследуемая культура (106 -107 бактерий в 1мл), мл.
0,1
0,1
0,1
0,1
0,1
0,1
0,1
Термостат +370C, 18 – 20 часов.
Примечание:
КК – контроль культуры
КА – контроль антибиотика
Þиз последней пробирки 2,0 мл выливают в дезинфицирующий раствор.
Учетным признаком является наличие или отсутствие мутности бульона (роста культуры) в пробирках. В контроле культуры должна быть мутность, в контроле антибиотика – нет. Величина МИК соответствует той минимальной концентрации тетрациклина, при которой отсутствует видимый рост возбудителя (бульон в пробирке прозрачный). Допустим, бульон будет мутным в опытных пробирках с концентрациями, 2, 4 и 8 мкг/мл, а в пробирках с концентрациями 16, 32 и 64 мкг/мл прозрачным. В этом случае МИК тетрациклина = 16 мкг/мл. Исходя из значений МИК, и зная концентрацию антибиотика (К) в сыворотке крови (очаге инфекции) после его введения, можно определить терапевтический индекс: Т=МИК/К. Терапевтический индекс не должен превышать значения 0,3. Известно, что величина “К” тетрациклина при введении средне-терапевтических дозы антибиотика равняется – 4 мкг/мл (при использовании максимальных доз – 10 мкг/мл). Следовательно, в данном случае терапевтический индекс будет равен Т = 16:4 = 4 (> 0,3), т.е. возбудитель устойчив к антибиотику и лечение тетрациклином не даст антимикробного эффекта в отношении S. aureus у данного больного.
Серийные разведения в плотных средах чаще используют для одновременного тестирования большого количества штаммов (для посева можно использовать специальный штамп-репликатор). Учетным признаком в этом случае является наличие или отсутствие роста на поверхности агара. Метод серийных разведений считается наиболее точным, но относительно трудоемким и дорогим.
2. Диско-диффузионный метод:
При определении чувствительности методом диффузии в агар, чистую культуру возбудителя засевают “газоном“ на агар Mueller-Hinton в чашке, например, тампоном, смоченном в стандартизованной (108 КОЕ/мл) суспензии микроорганизма. Затем на поверхность агара укладывают стандартные бумажные диски, пропитанные антибиотиками, которые диффундируют в агар, создавая градиент концентрации. На чашку диаметром 90 мм равномерно укладывают 6-8 дисков. После инкубирования в термостате измеряют диаметры зон задержки роста вокруг дисков и по специальным таблицам определяют степень чувствительности к тому или иному антибиотику: чувствительный, умеренно-устойчивый, устойчивый.
К категории чувствительных относят те штаммы, для подавления роста и размножения которых в организме больного, достаточным будет использование средних терапевтических доз антибиотика. В категорию умеренно-устойчивых относят микроорганизмы, для подавления роста которых, in vivo потребуются максимальные терапевтические дозы препарата. Категорию устойчивых составляют те микроорганизмы, в отношении которых данный антибиотик будет неэффективным in vivo.
3. Метод Е-тестов:
Метод определения чувствительности с помощью Е-тестов. Е-тесты представляют собой бумажные полоски, пропитанные не одной, а рядом убывающих концентраций определенного антибиотика (128, 64, 32, 16, 8, 4…….. мкг/мл). Е-тесты, как и диски при диско-диффузионном методе, укладывают на поверхность стандартного питательного агара, засеянного испытуемой культурой в виде “газона“. После инкубирования вокруг полоски формируется эллипсовидная зона задержки роста микроорганизма, которая сужается в области малых концентраций и “пересекает“ полоску на уровне, соответствующем величине МИК.
ПРАВИЛА ОФОРМЛЕНИЯ ОТЧЕТА.
1. Оформить журнал по технике безопасности.
2. Ответить письменно на контрольные вопросы.
3. Зарисовать морфологию микроорганизмов обнаруженных при микроскопии готового микропрепа
Санитарно-микробиологическое исследование воды
Среди объектов, подлежащих микробиологическому контролю в аптеках, важное место отводится исследованию воды. В соответствии с действующими нормативными документами контролю подлежит:
- во
ПРАВИЛА ОФОРМЛЕНИЯ ОТЧЕТА.
1. Ответить письменно на контрольные вопросы.
2. Составить акт отбора проб растительного лекарственного сырья и жидкой лекарственной формы для санитарно-микробиологического исследования.
ПРАВИЛА ОФОРМЛЕНИЯ ОТЧЕТА.
1. Ответить письменно на контрольные вопросы.
2. Составить акт отбора проб с рук, спецодежды, оборудования, лабораторной посуды для санитарно-микробиологического исследования.
3.
Объекты санитарно-бактериологического контроля
· Вода дистиллированная (для приготовления инъекционных растворов), вода очищенная (для приготовления нестерильных лекарственных форм)
· Аптечная посуда (флаконы, колбы, цилиндры, воронки,
Аптечной посуды и вспомогательного материала
Отбор проб: аптечную посуду в количестве 3 штук одного объема отбирают в момент приготовления лекарственных форм. Ее доставляют в лабораторию в укупоренном виде, используя пробки и проклад
Оборудования, рук и спецодежды персонала
Отбор проб: c рабочих столов, весов для взвешивания сухих веществ, тары для хранения вспомогательного материала, весов, оборудования, рук и спецодежды персонала пробы отбирают методом смыв
ПРАВИЛА ОФОРМЛЕНИЯ ОТЧЕТА.
1. Ответить письменно на контрольные вопросы.
2. Записать схему постановки опыта по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам диско-диффузионным методом
3. Дать
Препараты для профилактики ЧУМЫ
Чумная вакцина (Россия)
СОСТАВ. ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА. Вакцина чумная живая сухая представляет собой взвесь живых бактерий вакцинного штамма чумного ми
Дифлюкан
Действующее вещество: (Fluconazole)
Показания:
криптококкоз, включая криптококковый менингит и инфекции другой локализации (например легких, кожи), в т
ПРАВИЛА ОФОРМЛЕНИЯ ОТЧЕТА.
1. Ответить письменно на контрольные вопросы.
2. Зарисовать морфологию культур клеток, цитопатическое действие вирусов, включения при вирусных инфекциях
3. Записать способы культи
Препараты, применяемые для профилактики БЕШЕНСТВА
«Вакцина антирабическая культуральная концентрированная очищенная инактивированная сухая» (КОКАВ) (Россия)
СОСТАВ. ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА.Вакцина антирабическая
СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ И ДОЗИРОВКА.
Немедленно или как можно раньше после укуса или повреждения проводят обязательную местную обработку раны. Постановка кожного теста перед введением не требуется. Препарат вводят в как можно более р
Препараты для лечения и профилактики ПОЛИОМИЕЛИТА
Вакцина полиомиелитная пероральная 1, 2, 3 типов (Россия)
СОСТАВ. ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА. Вакцина представляет собой трехвалентный препарат из аттенуированных шт
Препараты для лечения и профилактики ГЕПАТИТОВ
Иммуноглобулин человека нормальный (Россия)
СОСТАВ. ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА. Представляет собой 10% раствор иммунологически активной белковой фракции,
Ингибиторы обратной транскриптазы ВИЧ
1. Нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы (НИОТ) Азидотимидин (АЗТ) - Ретровир, Тимазид. Форма выпуска - таблетки, капсулы по 100 мг. Правила приема: по 200 мг (
Ингибиторы фермента протеазы ВИЧ
Индинавир/Криксиван. Форма выпуска: капсулы по 400 мг. Правила приема: по 2 капсулы каждые 8 часов. Лекарство принимается на пустой желудок или во время еды с условием, что это не жирная
Новости и инфо для студентов