Определение мочевины в сыворотке крови по цветной реакции с диацетилмонооксимом.
Определение мочевины в сыворотке крови по цветной реакции с диацетилмонооксимом. - раздел Образование, Фракции остаточного азота Принцип Метода.Мочевина Образует С Диацетилмонооксимом В При...
Принцип метода.Мочевина образует с диацетилмонооксимом в присутствии тиосемикарбазида и солей железа в кислой среде окрашенные соединения, интенсивность окраски которых пропорциональна содержанию мочевины в сыворотке крови. Методы этой группы основаны на реакции Фирона, протекающей в два этапа. Первый этап заключается в гидролизе диацетилмонооксима с образованием диацетилкетона и гидроксиламина. На втором этапе диацетилкетон взаимодействует с мочевиной с образованием окрашенного диазинового производного. Для окисления гидроксиламина могут применяться: персульфат натрия, мышьяковая кислота, хлорная кислота, феназон, катионы. Для интенсификации окраски и ее стабильности применяются: тиосемикарбазид, фенилантраниловая кислота, глюкуронолактон, катионы, триптофан, нитриты.
Мочевина Диацетилмонооксим на первой стадии в воде распадается на диацетилкетон и гидроксиламин:
Далее образующийся диацетилкетон конденсируется c мочевиной, образуя окрашенное диазиновое производное. Это соединение (ярко-розового цвета) поглощает свет в видимой области спектра при 500 – 560 нм, молярный коэффициент экстинкции (e) порядка нескольких тысяч, что позволяет определить очень малое содержание мочевины (гораздо более низкое, чем содержание в крови).
Фракции остаточного азота
Низкомолекулярные азотистые вещества представлены, главным образом, продуктами обмена белков и нуклеиновых кислот. Эти вещества остаются в надосадочной жидкости или фильтрате после осаждения крупно
Методы определения мочевины
Основные группы методов определения содержания мочевины подразделяют на:
1.Ксантгидроловые: гетероциклический спирт ксантгидрол вступает в реакцию с мочевиной и образует н
Ход определения.
1.В центрифужную пробирку вносят 0,8 мл дистиллированной воды, 0,2 мл сыворотки крови и 1,0 мл раствора 10% ТХУ, содержимое ее смешивают. Через 15 – 20 мин смесь центрифугируют при 3000 об/мин.
Нормальные величины
Сыворотка
(по реакции с диацетилмонооксимом)
новорожденные
1,4‑4,3 ммоль/л
дети
Сыворотка
Уровень мочевины зависит от скорости ее синтеза в печени и выделения через почки, а также от величины белкового катаболизма.
Повышение уровня мочевины может наблюдаться пр
Методы определения мочевой кислоты.
Существующие методы определения концентрации мочевой кислоты можно разделить на несколько групп:
1. Колориметрические — все эти методы недостаточно специфичны и основаны на:
Реактив Фолина.
2.Трихлоруксусная кислота – 20 г/100 мл
3. Стандартный раствор мочевой кислоты. 100 мг мочевой кислоты помещают в колбу на 500 мл. Затем в нее добавляют 25 мл раст
Ход определения.
1.0,3 мл сыворотки вносят в обычную химическую пробирку, которую затем погружают в кипящую водяную баню на 2 мин.После охлаждения в нее добавляют 3 мл дистиллированной воды и сгусток экстрагируют п
Нормальные величины
Сыворотка (указанный метод)
дети
0,12‑0,32 ммоль/л
мужчины
0,24‑0,50 ммоль/л
Сыворотка
В крови выделяют два типа повышения содержания мочевой кислоты (гиперурикемии): первичную и вторичную.
Первичная гиперурикемия отмечается в связи с подагрой, связанной с у
Методы определения креатинина
Креатинин
Существующие методы определения концентрации креатинина делятся на следующие группы.
1. Колориметрические:
основанные на р
Методы определения молекул средней массы
Молекулы средней массы (МСМ) или среднемолекулярные пептиды (СМП) в основной своей части представлены пептидами с молекулярной массой 300-5000 Д. Эта фракция включает в себя гормоны, нейропептиды,
Ход определения
1.В центрифужную пробирку помещают 0,5 мл плазмы (сыворотки) крови, добавляют 0,5 мл раствора хлорной кислоты (реактив 1), тщательно перемешивают встряхиванием, оставляют при комнатной температуре
Клинико-диагностическое значение.
Уровень МСМ в плазме (сыворотке) крови значительно увеличивается при ряде патологических состояний: онкологических заболеваниях, хронической почечной недостаточности, язвенной болезни желудка, пора
Методы определения аминного азота
Свободный аминный азот (аминоазот) представляет собой азот аминокислот, содержащихся в сыворотке (плазме) крови (в отличие от общего аминного азота, включающего также азот сложных полипептидов и бе
Ход определения.
1.Осаждение белков. Центрифужную пробирку с внесенными в нее 0,5 мл сыворотки и 0,5 мл СН3СООН прикрывают пробкой и помещают в холодную водяную баню, воду в которой доводят до кипения. П
Хотите получать на электронную почту самые свежие новости?
Подпишитесь на Нашу рассылку
Наша политика приватности обеспечивает 100% безопасность и анонимность Ваших E-Mail
Новости и инфо для студентов