рефераты конспекты курсовые дипломные лекции шпоры

Реферат Курсовая Конспект

Разработка условий выделения препарата Penicillium wortmannii BKMF

Разработка условий выделения препарата Penicillium wortmannii BKMF - раздел Химия, Исследование некоторых физико-химических свойств протеиназы Penicillium wortmannii Разработка Условий Выделения Препарата Penicillium Wortmannii Bkmf. Для Выдел...

Разработка условий выделения препарата Penicillium wortmannii BKMF. Для выделения ферментов из различных сред в лабораторных условиях и в промышленности чаще всего применяют органические растворители и нейтральные соли. Эффект осаждения белков органическими растворителями, как известно 7 , основан на явлении уменьшения сольватации полярных групп фермента.

Молекулы воды, расположенные на гидрофобных участках поверхности белка, могут быть замещены на молекулы органического растворителя. При этом растворимость белков падает, происходит агрегирование и осаждение белковых молекул. В качестве осадителей использовали 96,5 этанол, 98,0 изопропанол, химически чистый ацетон и сульфат аммония. Органические растворители и сульфат аммония добавляли к охлажденной до 0 - 4oС культуральной жидкости Pen. Wortmannii 2091 при различных значениях рН и постоянном перемешивании.

Образовавшийся осадок отделяли центрифугированием, растворяли в небольшом объёме дистиллированной воды и определяли протеолитическую активность. Результаты исследования влияния рН на полноту осаждения протеолитического комплекса при концентрации растворителей 60 представлены на рис. 1, из которого видно, что оптимальным является значение рН 7,5 при использовании всех видов органических растворителей.

Вероятно, изоэлектрическая точка для данного фермента лежит в этой области рН. В дальнейшем нами проводились исследования по влиянию концентрации органических растворителей на выход фермента при оптимальном значении рН. Наблюдалось монотонное осаждение фермента при последовательном увеличении концентраций осадителей, выход фермента возрастал до определённого предела табл. 1 . Как видно из табл. 1, концентрация органических растворителей значительно влияет как на выход протеолитического комплекса, так и на степень его очистки.

При использовании этанола наиболее эффективной для выхода ПА была концентрация 72,0 . Степень очистки 1,27. Максимальный выход 98,5 по активности. Оптимальная концентрация ацетона 66,6 в объёмных соотношениях 1 2 . Степень очистки была более высокой, чем для этанола 1,5 раза - однако выход по активности всего 62 . Лучшим органическим осадителем для протеиназы Pen. Wortmannii 2091 явился изопропанол.

При концентрации его в смеси 50 выход протеиназы составил 90, 5 , степень очистки 2,78 и удельная активность 3,06. Таким образом, изопропанол избирательно осаждает протеолитические ферменты, что повышает степень их очистки и снижает содержание баластных примесей. Однако на практике вполне можно использовать и этанол. В дальнейшем проведены исследования по осаждению протеиназы сульфатом аммония. Было установлено, что при оптимальных условиях степень насыщения 0,8 рН 7,5 выход фермента составил всего 23 . Низкий вы- Таблица 1Получение препарата протеиназы из культуральной жидкости Penicillium wortmannii 2091 осаждением органическими растворителями.

Содержание осадителя Общая активность, ед Белок, мг см3 Общий белок, мг Вес препаратов, мг Удельная активность, ед мг белка Выход по активности, Очистка В объёмных отношениях В Ацетон Культуральная жидкость рН 7,5 2,5 2,250 62,5 - 1,10 100,0 1,00 1 1 50 179,0 0,180 21,6 120 0,99 17,4 0,90 1 2 66,6 222,0 0,133 46,4 349 1,67 62,0 1,50 1 3 75,0 213,0 0,233 51,9 223 0,91 38,0 0,82 1 4 80,0 203,0 0,216 64,6 299 0,94 49,0 0,85 Изопропанол Культуральная жидкость рН 7,5 2,5 2,250 62,5 - 1,10 100,0 1,00 1 1 50,0 392,0 0,128 36,9 288 3,06 90,5 2,78 1 2 66,6 385,4 0,232 67,4 290 1,65 92,0 1,50 1 3 75,0 215,0 0,282 211,5 350 0,76 60,0 0,69 1 4 80,0 183,0 0,132 42,2 320 1,39 46,0 1,26 Этанол Культуральная жидкость рН 7,5 2,5 2,250 62,5 - 1,10 100,0 1,00 1 1 48,0 320,3 0,396 85,1 215 0,80 55,0 0,73 1 2 64,0 366,7 0,340 90,1 265 1,08 77,6 0,98 1 3 72,0 385,4 0,276 135,2 320 1,40 98,5 1,27 1 4 80,0 349,6 0,250 160,0 335 1,40 93,7 1,27 ход фермента не позволил в дальнейшем использовать эту соль для получения препарата Pen. Wortmannii BKMF 2091.Из анализа вышеприведённых данных можно сделать вывод, что для осаждения препарата протеиназы целесообразно применение этанола и изопропанола. В зависимости от назначения препарата возможно применение этого или иного растворителя с практически одинаковым эффектом. 3.2

– Конец работы –

Эта тема принадлежит разделу:

Исследование некоторых физико-химических свойств протеиназы Penicillium wortmannii

Вещества белковой природы, способные каталитически ускорять химические реакции, называют ферментами. Роль ферментов в жизнедеятельности животных, растений и микроорганизмов… Биологические катализаторы по ряду признаков резко отличаются от неорганических катализаторов.

Если Вам нужно дополнительный материал на эту тему, или Вы не нашли то, что искали, рекомендуем воспользоваться поиском по нашей базе работ: Разработка условий выделения препарата Penicillium wortmannii BKMF

Что будем делать с полученным материалом:

Если этот материал оказался полезным ля Вас, Вы можете сохранить его на свою страничку в социальных сетях:

Все темы данного раздела:

Протеиназы микробного происхождения
Протеиназы микробного происхождения. Протеолитические ферменты синтезируются практически всеми живыми существами. В промышленных целях как источник протеиназ используются животные ткани, растения и

Выделение и очистка препаратов протеиназы
Выделение и очистка препаратов протеиназы. Современный уровень науки и техники позволяет получить не только комплексные, но и гомогенные, кристаллические ферменты. Их, как правило, выделяют

Расщепление коллагенсодержащего сырья и его применение
Расщепление коллагенсодержащего сырья и его применение. Перспективное направление обработки коллагенсодержащего сырья - его ферментация. Авторами обзора 5 показано, что употребляемые

Материалы и методы исследования
Материалы и методы исследования. Определение величины рН. Величину рН определяли потенциометрически на рН-метре ЛПУ-01. Для измерений значений рН растворов в температуре отличной от 20oС, применяли

Определение коллагеназной активности
Определение коллагеназной активности. Коллагеназную активность определяли по содержанию оксипролина в смеси, образовавшегося в результате действия фермента на нативный коллаген. С этой целью

Определение содержания аминного азота
Определение содержания аминного азота. Метод основан на образовании цветного комплекса при взаимодействии аминогрупп аминокислот с гидроксидом меди. В пробирку, содержащую 100 мг сухого медн

Определение гомогенности очищенных препаратов
Определение гомогенности очищенных препаратов. Электрофорез проводили по методу Дэвиса на приборе фирмы Reanol Венгрия в щелочной буферной системе, рН 8,9. Концентрация акриламина в мелкопор

Идентификация протеиназ в ПААГ
Идентификация протеиназ в ПААГ. Для проявления в гелях полос с протеиназой их выдерживали в денатурированном растворе гемоглобина 2 концентрации в течение 15 - 30 минут при температуре 30oС. Затем

Фракционирование протеолитического комплексного препарата ферментов
Фракционирование протеолитического комплексного препарата ферментов. Полученный осаждением органическими растворителями препарат нами назван протовортманин Г10х. В дальнейшем представляло ин

Влияние температуры и рН на активность фермента
Влияние температуры и рН на активность фермента. Нами была поставлена цель определить рН и температурные оптимумы действия выделенных протеиназ Penicillium wortmannii 2091 и дать их сравнительную х

Исследование процессов кислотной и термической инактивации
Исследование процессов кислотной и термической инактивации. Изучение термо- и рН-стабильности ферментов часто несёт прикладной характер. Исследование этих характеристик проводится остаточной

Влияние ионов металлов и ингибиторов на активный центр фермента
Влияние ионов металлов и ингибиторов на активный центр фермента. Главным признаком, используемым при отношении протеолитических ферментов к тому или иному классу, является строение каталитического

Межпредметность - современный принцип обучения
Межпредметность - современный принцип обучения. Совершенствование содержания образования в школе опирается на комплексное использование в обучении межпредметных связей. Это является одним из критер

Межпредметные связи на уроках химии
Межпредметные связи на уроках химии. Реализация межпредметных связей химии с другими дисциплинами предполагает осуществление комплексного подхода к отбору учебного материала, т.е. привлечени

Хотите получать на электронную почту самые свежие новости?
Education Insider Sample
Подпишитесь на Нашу рассылку
Наша политика приватности обеспечивает 100% безопасность и анонимность Ваших E-Mail
Реклама
Соответствующий теме материал
  • Похожее
  • Популярное
  • Облако тегов
  • Здесь
  • Временно
  • Пусто
Теги